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武漢科銳諾生物科技有限公司
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點對點酵母雙雜交驗證實驗流程
1、誘餌蛋白毒性及自激1活檢測；
2、共轉(zhuǎn)化：分別將誘餌/捕獲質(zhì)粒（pGBKT7-Bait/pGADT7-Prey）、陽性對照質(zhì)粒（pGBKT7-p53/pGADT7-T）、陰性對照質(zhì)粒（pGBKT7-Lam/pGADT7-T）分別共轉(zhuǎn)到Y(jié)2H Gold感受態(tài)細胞中，涂布于DDO平板培養(yǎng)；
3、點板驗證：分別從平板上挑單克1隆稀釋10倍、100倍、1000倍，然后點板到TDO/X/A和QDO/X/A固體培養(yǎng)基進行驗證；
4、實驗數(shù)據(jù)與報告整理。
雜交結(jié)束后，去除雜交液，立即于室溫把濾膜放入大體積（300-500ml）的2×SSC和0.1% SDS溶液中，輕輕振搖5分鐘，并將濾膜至少翻轉(zhuǎn)一次。重復洗 一次，同時應避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次，每次1-1.5小時。此時已可進行自顯影。如背景很高或?qū)嶒炓髧栏竦南茨l件，可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后，把濾膜（編號面朝上）放在一張保鮮膜上，并在保鮮膜上作幾個不對稱的標記，以使濾膜與性自顯影片位置對應。
用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加X片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時。
底片顯影后，在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標記陽性雜交信號的位置，同時在不對稱分布點的位置上作出標記?？蓮牡灼先∠峦该骷垼ㄟ^對比紙上的點與瓊脂上的點來鑒定陽性菌落。
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第4年
