湖北熒光原位雜交-貝科新肽
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武漢貝科新肽科技有限公司
- 主營業(yè)務(wù):原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
- 公司官網(wǎng):bkxtbio.com.cn
- 公司地址:湖北省武漢市洪山區(qū)關(guān)山大道289號(hào)紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號(hào)
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(夏先生 先生)
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FISH技術(shù)的基本步驟包括探針制備、樣品預(yù)處理、探針與樣品的雜交、信號(hào)檢測和圖像分析等。在探針制備過程中,使用熒光標(biāo)記物代替同位素標(biāo)記物來標(biāo)記探針。在樣品預(yù)處理過程中,細(xì)胞或組織的固定、裂解和去除非特異性蛋白質(zhì)等操作都是必要的,以提高探針與目標(biāo)序列的親和力和特異性。在探針與樣品的雜交過程中,探針與樣品中的目標(biāo)序列進(jìn)行互補(bǔ)性雜交,形成可檢測的熒光信號(hào)。在信號(hào)檢測和圖像分析過程中,使用高靈敏度熒光顯微鏡檢測熒光信號(hào)并獲取高分辨率的細(xì)胞圖像。

①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位,可用于基因圖譜,熒光原位雜交,基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究;②組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位,如EB病毒mRNA、人類狀瘤病毒和巨細(xì)胞病毒DNA的檢測;③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測;④基因在染色體上的定位;⑤檢測染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等;⑥分裂間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,某些的診斷和生物學(xué)劑量測定等。

這一原理對(duì)于檢測一個(gè)特異的mRNA在某一種生物體,或者某些組織切片、單個(gè)細(xì)胞里具體表達(dá)位置非常有用。該技術(shù)早應(yīng)用于60年代末期,由于核酸分子雜交的特異性高,并可定位,因此該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用,例如與細(xì)胞內(nèi)RNA進(jìn)行雜交以觀察該組織細(xì)胞中特定基因表達(dá)水平。原位雜交能在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì)胞的研究而不受同一組織中其他成分的影響,因此對(duì)于那些細(xì)胞數(shù)量少且散在于其他組織中的細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA研究更為方便;同時(shí)由于原位雜交不需要從組織中提取核酸,對(duì)于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,并可完整地保持組織與細(xì)胞的形態(tài),更能準(zhǔn)確地反映出組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。

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