原位雜交技術(shù)可以應(yīng)用于以下場景:
組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位。例如,可以用于檢測EB病毒mRNA、人類狀瘤病毒和巨細(xì)胞病毒DNA等。
癌基因、抑癌基因及其他各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測。
檢測染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等。
在植物基因組研究中的應(yīng)用。例如,通過與特定基因序列的探針進(jìn)行雜交,可以在植物染色體上定位到目標(biāo)基因的位置,進(jìn)而構(gòu)建遺傳圖譜,為植物育種和基因組研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
原位雜交第三天
1) 用1ml含10%熱滅清的MABT溶液置換溶液,放置搖床上25分鐘,然后用1mlMABT置換,25分鐘,湖北原位雜交,再用1mlMABT溶液置換,一小時以上,后用1mlMABT溶液置換,25分鐘。
2) 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次,每次放置五分鐘。
3)將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中,熒光原位雜交,吸去staining buffer,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上錫箔紙以避光,避免搖動,室溫下顯色。
4)每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色
5)將顯色完全的胚胎中的底物吸出,用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定,植物原位雜交,拍照。
6)4C冰箱保存。
植物原位雜交除了在遺傳育種方面的應(yīng)用,還在其他領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,包括:
植物基因表達(dá)模式研究:通過植物原位雜交技術(shù)可以檢測特定基因在不同組織或不同生長條件下的表達(dá)模式,染色體原位雜交,有助于了解基因的功能和作用機(jī)制。
植物基因組研究:植物原位雜交技術(shù)可以用于基因組研究,例如染色體構(gòu)象、基因組變異和基因組進(jìn)化等方面,有助于深入了解植物基因組的特征和結(jié)構(gòu)。
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