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染色體原位雜交檢測(cè)服務(wù)-武漢科銳諾生物(圖)

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滴加封閉液：37℃30分鐘。甩去多余液體，不洗。

.滴加生物素化鼠抗地1高辛：37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

滴加SABC：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

滴加生物素化過氧化物酶：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。

DAB顯色：使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑Ａ，Ｂ，C各一滴，混勻，加至標(biāo)本上。一般顯色20-30分鐘。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。

.蘇1木素復(fù)染，充分水洗。

酒精脫水，二甲1苯透明，封片。

原理

根據(jù)抗原反應(yīng)和化學(xué)顯色原理，染色體原位雜交檢測(cè)服務(wù)，組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合，再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進(jìn)行反應(yīng)，前者再用標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結(jié)合，后通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分，在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。

多彩色熒光原位雜交(multicolorfluorescenceinsituhybridization，mFISH)。它用幾種不同顏色的熒光素單獨(dú)或者混合標(biāo)記的探針進(jìn)行原位雜交，能同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因，擴(kuò)大了FISH技術(shù)的臨床應(yīng)用。FISH技術(shù)目前主要應(yīng)用于染色體和DNA水平上的病理診斷檢測(cè)。染色體FISH主要檢測(cè)染色體易位、缺失、重復(fù)、變異等;DNAFISH主要是檢測(cè)基因突變、擴(kuò)增、易位、缺失。與原位雜交技術(shù)相比，F(xiàn)ISH更加安全、快速，特異性好、定位準(zhǔn)確。

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