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武漢科銳諾生物科技有限公司

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植物原位雜交技術(shù)服務(wù)-科銳諾生物科技(圖)

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意義

在研究DNA分子原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種技術(shù)。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,能過(guò)氫鍵結(jié)合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點(diǎn),應(yīng)用帶有標(biāo)記的(有性同位素,如3H、35S、32P、熒光素生物素、等非性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測(cè)核酸(RNA或DNA)片段進(jìn)行雜交,然后可用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位;用原位雜交技術(shù),可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)。此方法有很高的敏感性和特異性,可進(jìn)一步從分子水平來(lái)探討細(xì)胞的功能表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制。已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。

適用場(chǎng)景

1、高靈敏度地檢測(cè)蛋白-蛋白的交互作用;

2、尋找在蛋白-蛋白交互作用中起關(guān)鍵作用的結(jié)構(gòu)域或活性位點(diǎn);

3、尋找與靶蛋白相互作用的新蛋白;

4、尋找具有藥1物治1療作用的小分子多肽;

5、尋找調(diào)控蛋白質(zhì)相互作用的化合物;

6、繪制蛋白質(zhì)相互作用圖譜。

酵母雙雜交技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)

1、無(wú)需純化蛋白;

2、檢測(cè)在活1細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行,可以在一定程度上代表體內(nèi)的真實(shí)情況;

3、檢測(cè)的結(jié)果是基因表達(dá)產(chǎn)物的積累效應(yīng),植物原位雜交技術(shù)服務(wù),因而可檢測(cè)存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時(shí)的相互作用;

4、酵母雙雜交系統(tǒng)可采用不同組織、器1官、細(xì)胞類型和分化時(shí)期材料構(gòu)建cDNA文庫(kù),并能分析細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等多種亞細(xì)胞部位的蛋白。

應(yīng)用于分子病理診斷的DNA測(cè)序技術(shù)有直接測(cè)序法和焦磷酸測(cè)序法。直接測(cè)序技術(shù)主要是Sanger等發(fā)明的雙脫氧鏈末端終止法。其原理就是根據(jù)核苷酸在某一固定的點(diǎn)開(kāi)始,隨機(jī)在某一個(gè)特定的堿基處終止,產(chǎn)生A、T、C、G4組不同長(zhǎng)度的一系列核苷酸,然后在尿素變性的PAGE膠上電泳進(jìn)行檢測(cè),從而獲得DNA序列。直接測(cè)序法是基因突變檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”,其優(yōu)點(diǎn)是結(jié)果準(zhǔn)確,重復(fù)性好,可檢測(cè)整個(gè)測(cè)序范圍內(nèi)已知和未知突變點(diǎn);缺點(diǎn)是步驟多,耗時(shí)長(zhǎng),靈敏度低,過(guò)程不易控制,在檢測(cè)已知突變位點(diǎn)方面將逐漸被熒光定量PCR法替代。

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