病理切片的制作步驟注意事項:
一、負(fù)責(zé)組織處理的技術(shù)員從醫(yī)生手中收標(biāo)本時,必須清點查對,無誤后簽收。
二、組織脫水、包埋、切片、染色、封片等,均應(yīng)按照技術(shù)規(guī)范進(jìn)行,對每道工序,都必須查對組織數(shù)量,檢查是否遺漏、丟失。
HE染色是制作切片過程中較為常用的染色方法之一,細(xì)胞核被蘇染成鮮明的藍(lán)色,基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。著況與組織或細(xì)胞的種類有關(guān),也隨其生活周期及病理變化而改變。例如,細(xì)胞在新生時期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當(dāng)其衰老時或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時,伊紅著色由淺變深。常見的生物切片,植物石蠟切片技術(shù)服務(wù),厚度一般在幾微米的程度,這種厚度制作起來比較簡單,除了可以使用自動化的設(shè)備來切片之外,手動操作也能切到這種厚度,而且完夠滿足光學(xué)顯微鏡下觀察的標(biāo)準(zhǔn)。不過在前沿的科研領(lǐng)域里,需要觀察更細(xì)微的細(xì)胞結(jié)構(gòu),甚至需要從分子的層面來進(jìn)行研究,這時候就需要用到電子顯微鏡。然而電子顯微鏡也需要更薄的樣品,切片至少要達(dá)到0.1微米的厚度,而這種切片也就被稱為是超薄切片,在很多實驗研究里需要厚度達(dá)到50納米,顯然手I操作是無法達(dá)到這種厚度的。那么在實驗環(huán)境下是怎樣做成這種超薄生物切片的呢?首先是需要進(jìn)行更好的固定,因為在如此薄的尺度之下,不但基本的細(xì)胞結(jié)構(gòu)都已經(jīng)被完全破壞,而且其中的細(xì)胞器也都被切開,里面的生物酶會釋放出來,并且在很短的時間內(nèi)使細(xì)胞結(jié)構(gòu)遭到破壞。所以就需要在取得樣品之后盡快進(jìn)行固定,要求在一-分鐘之 內(nèi)完成這項操作,然后再使用對應(yīng)的材料來做透明化以及包埋,接下來還需要配合的切片機(jī)來完成切片的過程,從而達(dá)到理想的厚度。
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