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武漢科銳諾生物科技有限公司

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胞外囊泡粒徑及濃度檢測(cè)-科銳諾(推薦商家)

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外泌體研究開展的如火如荼。不論是 SCI 文章的發(fā)表還是各類基1金的申請(qǐng),外泌體相關(guān)研究表現(xiàn)都非常亮眼。外泌體提取后,研究人員面臨的一個(gè)重要問(wèn)題就是,我提取的是不是外泌體?如果是的話,質(zhì)量如何?

現(xiàn)階段,對(duì)外泌體進(jìn)行鑒定主要有三種主流的方法:電鏡、粒徑和 Western blot 分析靶標(biāo)物。之前我們已經(jīng)對(duì)外泌體電鏡進(jìn)行了總結(jié),胞外囊泡粒徑及濃度檢測(cè),今天我們來(lái)看看外泌體的粒徑分析。

外泌體粒徑分析原理

外泌體粒徑分析方法為納米顆粒跟蹤分析(Nanoparticle tracking Analysis, NT A),其原理是對(duì)每個(gè)顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)進(jìn)行追1蹤和分析,結(jié)合 Stockes-Einstein 方程式計(jì)算出納米顆粒的流體力學(xué)直徑和濃度。NT A技術(shù)已被外泌體研究領(lǐng)域認(rèn)可為外泌體表征手段之一。相較于其他表征方式,NT A技術(shù)的樣本處理更簡(jiǎn)單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度更快。

外泌體的組成:外泌體主要含有融合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、熱休1克蛋白(HSP 70)、CD類蛋白以及磷脂酶和其他脂質(zhì)相關(guān)蛋白,但是不同來(lái)源的外泌體的組成有差異。

外泌體的提取方式:

1、離心法:此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足。

2、過(guò)濾離心:這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí),不影響外泌體的生物活性,但同樣純度不足。

3、密度梯度離心法:用此種方法分離到的外泌體純度較高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜

4、免1疫磁珠法:這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,特異性高、操作簡(jiǎn)單,但生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性。

5、色譜法:此種方法分離出的外泌體大小均一,但設(shè)備特殊,應(yīng)用不廣泛。

據(jù)國(guó)際細(xì)胞外囊泡學(xué)會(huì)(ISEV)在2014年的提議,外泌體鑒定3個(gè)標(biāo)志:透射電鏡(transmission electron microscope,TEM)、粒徑(Nanoparticle Tracking Analysis, NTA)、蛋白標(biāo)志物(Western Blot, WB)。

外泌體透射電鏡TEM鑒定外泌體大小、形態(tài),判斷樣本是否含有外泌體。

外泌體透射電鏡分辨率為0.1~0.2nm,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,可觀測(cè)樣本中是否存在外泌體樣結(jié)構(gòu)(通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形),同時(shí)可測(cè)量外泌體大小。

檢測(cè)平臺(tái):TecnaiTM G2 Spirit BioTWIN

檢測(cè)結(jié)果:三張透射電鏡圖片,盡可能體現(xiàn)完整的外泌體形態(tài)(如有)

檢測(cè)周期:10-15個(gè)工作日

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