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分子病理技術(shù)服務(wù)-科銳諾生物科技

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原位雜交雜交液注意事項(xiàng)：

       （1）雜交液內(nèi)除含一定濃度的標(biāo)記探針外，還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等。

       （2）雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加，可以減低探針與組織標(biāo)本之間的靜電結(jié)合。甲酰胺可使Tm降低，雜交液中含每1%的甲酰胺可分別使RNA：RNA，RNA：DNA，DNA：DNA的雜交溫度降低0.35℃，0.5℃和0.65℃。，所以雜交液中加入適量的甲酰胺，可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標(biāo)本的脫落。硫酸葡聚糖能與水結(jié)合，從而減少雜交液的有效容積，提高探針有效濃度，以達(dá)到提高雜交率的目的（尤其對(duì)雙鏈核酸探針）。

       在雜交液中加入牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等，分子病理技術(shù)服務(wù)，都是為了阻斷探針與組織結(jié)構(gòu)成分之間的非特異性結(jié)合，以減低背景。

將少數(shù)菌落轉(zhuǎn)移到纖維素濾膜上

（1） 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。

（2） 用無(wú)菌牙簽將各個(gè)菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上，再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應(yīng)按一定的格子進(jìn)行劃線接種（或打點(diǎn)）。每菌落應(yīng)分別劃線于兩個(gè)平板的相同位置上。后，在濾膜和主平板上同時(shí)劃一個(gè)含有非重組質(zhì)粒的菌落。

（3） 倒置平板，于37℃培養(yǎng)至劃線的細(xì)菌菌落生長(zhǎng)到0.5-1.0mm的寬度。

（4） 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂，在3個(gè)以上的不對(duì)稱位置作標(biāo)記。在主平板大致相同的位置上也作上標(biāo)記。

（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置貯放于4℃，直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果。

（6） 裂解細(xì)菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結(jié)合于纖維素濾膜。

目前，我國(guó)已穩(wěn)定開展的分子病理技術(shù)主要有顯色原位雜交、熒光原位雜交、PCR、熒光定量PCR、基因芯片和DNA測(cè)序技術(shù)DNA原位雜交主要用于基因定位、特異基因(如病原微生物基因)檢測(cè)等;RNA原位雜交則用于基因表達(dá)檢測(cè)。原位雜交技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，可直接定位組織，價(jià)格低廉，信號(hào)穩(wěn)定，儲(chǔ)存方便，可做組織學(xué)評(píng)價(jià)，是目前應(yīng)用較多的分子病理技術(shù)之一。

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