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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營(yíng)：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
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原位雜交（in situ hybridization）將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交，稱(chēng)為原位雜交，使用DNA或者RNA探針來(lái)檢測(cè)與其互補(bǔ)的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置。
原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列，將有放1射性或非放1射性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測(cè)DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì)，結(jié)合成專(zhuān)一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測(cè)手段將待測(cè)核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來(lái)。為顯示特定的核酸序列必須具備3個(gè)重要條件：組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物
癌組織原位雜交實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 將準(zhǔn)備做原位雜交的樣本常規(guī)脫水、浸蠟、包埋。切片厚度6-8μm。
2. 玻片的處理：一般采用多聚賴(lài)氨酸或APES。
3. 石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟至水。30%H2O2 1份+蒸餾水10份混合，室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。
4. 暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶（1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻），37℃或室溫消化3--30分鐘（視標(biāo)本新舊、厚薄自行調(diào)整）。原位雜交用PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。
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