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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術服務
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后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.2-7.6），含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
原位雜交的預雜交：濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體，不洗。
雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專1用蓋玻片的保護膜揭開后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據(jù)雜交情況可以調節(jié))。
雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
原理
根據(jù)抗原反應和化學顯色原理，組織切片或細胞標本中的抗原先和一抗結合，再利用一抗與標記生物素、熒光素等的二抗進行反應，前者再用標記辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結合，后通過呈色反應或熒光來顯示細胞或組織中化學成分，在光學顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細胞內發(fā)生的抗原反應產物，從而能夠在細胞爬片或組織切片上原位確定某些化學成分的分布和含量。
在酵母雙雜交系統(tǒng)中，BD與X蛋白融合，AD與Y蛋白融合，如果X、Y之間形成蛋白-蛋白復合物，AD與BD會在空間上充分接近，重新構成結構域，玉米原位雜交技術服務，啟動報告基因的轉錄。擁有BD質粒的酵母可以在某一缺陷培養(yǎng)基上生長，擁有AD質粒的酵母菌可以在另一種缺陷培養(yǎng)基上生長，通過接合（mating）或共轉化使酵母同時擁有AD與BD質粒。如果BD上的目的蛋白與AD上的誘餌蛋白存在相互作用，這樣的酵母可以在三缺及四缺的培養(yǎng)基上生長，并啟動β-半乳糖苷酶基因的轉錄。
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第3年
